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RNA pull down實驗技術

更新時間:2021-09-23點擊次數:4277

RNA pull down實驗技術


1. 實驗原理

RNA pull down是體外研究RNA與蛋白互作的重要技術該技術是用生物素標記體外轉錄的靶RNA分子,再用鏈霉親和素純化出與靶RNA結合的蛋白復合體,洗脫得到RNA結合蛋白質。再通過western blot實驗檢測特定的RNA結合蛋白是否與靶RNA結合;或通過質譜儀檢測可以篩選出與靶RNA結合的蛋白。

生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用;其中活化生物素可以在蛋白質交聯劑的介導下,與已知的幾乎所有生物大分子偶聯。因此用生物素標記核酸后,可以純化出與該核酸結合的各種生物大分子復合物。

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2. 實驗流程

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1)探針設計及標記:體外轉錄或合成獲取RNA,生物素標記;

2)pull down:與細胞裂解液孵育,形成RNA-蛋白質復合物。該復合物可與鏈霉親和素磁珠結合,從而把靶RNA結合蛋白從細胞裂解液中分離出來,經過洗滌將非特異性結合蛋白質去除;最后,洗脫得到與靶RNA結合的蛋白質復合物;

3)互作蛋白質鑒定:再經過Western Blot(WB)或質譜(MS)鑒定蛋白質。

3. 服務內容

1)體外轉錄或合成RNA,生物素標記;

2)細胞培養(yǎng)與細胞裂解液制備;

3)pull down捕獲互作蛋白;

4)Western blot驗證互作蛋白;

5)MS篩選鑒定互作蛋白。

4. 交付結果

1)提供詳細、完整的實驗報告;

2)客觀公正的原始數據和實驗分析結果。

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