細(xì)胞流式檢測(cè)服務(wù)(FACS)

細(xì)胞流式檢測(cè)是一種在液體系統(tǒng)中，快速測(cè)定單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞器的生物、物理和化學(xué)特性，并根據(jù)這些特性將所需要的細(xì)胞或細(xì)胞器進(jìn)行定量分析和分選的技術(shù)。它是一種可以快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)細(xì)胞或者生物學(xué)顆粒的多種特性的技術(shù)，用來了解細(xì)胞群的均值和分布情況，并還可以分選感興趣的細(xì)胞、對(duì)該細(xì)胞做進(jìn)一步的培養(yǎng)研究。

流式檢測(cè)服務(wù)項(xiàng)目：免疫表型分型、表面抗原鑒定、DNA含量檢測(cè)/細(xì)胞核型分析、細(xì)胞周期檢測(cè)、細(xì)胞凋亡檢測(cè)、細(xì)胞分選、細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測(cè)、線粒體膜電位檢測(cè)等。

細(xì)胞凋亡(apoptosis)是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。它在生物體的進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個(gè)系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細(xì)胞凋亡不僅是一種特殊的細(xì)胞死亡類型，而且具有重要的生物學(xué)意義及復(fù)雜的分子生物學(xué)機(jī)制。凋亡是多基因嚴(yán)格控制的過程，這些基因在種屬之間非常保守，如Bcl-2家族、caspase家族、癌基因如C-myc、抑癌基因P53等。而凋亡過程的紊亂可能與許多疾病的發(fā)生有直接或間接的關(guān)系。如腫瘤、自身免疫性疾病等，能夠誘發(fā)細(xì)胞凋亡的因素很多，如射線、藥物等。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，不同區(qū)域內(nèi)（如細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、線粒體、細(xì)胞核等）會(huì)發(fā)生不同的生理生化改變。因此，針對(duì)不同區(qū)域的細(xì)胞凋亡檢測(cè)要采用不同的方法。

1）Annexin V 凋亡檢測(cè)

原理：Annexin Ⅴ是一種分子量為35-36kD的Ca依賴性磷脂結(jié)合蛋白，正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphatidylserine, PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細(xì)胞發(fā)生凋亡早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V作為一種磷脂結(jié)合蛋白，與PS有高度親和力，它通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V是檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)。該方法通常結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)一起使用。

2）線粒體膜電位分析（JC-1）

JC-1是一種廣泛用于檢測(cè)線粒體膜電位的理想熒光探針?？梢詸z測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位，線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。

原理：在線粒體膜電位較高時(shí)，JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)（matrix）中，形成聚合物（J-aggregates），可以產(chǎn)生紅色熒光（Ex/Em = 585/590）；在線粒體膜電位較低時(shí)，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時(shí)JC-1為單體（monomer），可以產(chǎn)生綠色熒光（Ex/Em = 510/527 nm）。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測(cè)線粒體膜電位的變化。

3）Caspase活性檢測(cè)

Caspase半胱氨酸蛋白酶家族引發(fā)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)是細(xì)胞凋亡過程的中心環(huán)節(jié)，其激活主要包括線粒體依賴途徑和死亡受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。

原理：激活后的下游 Caspase，通過切割特異性底物，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Caspase的活化是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的中心環(huán)節(jié)，細(xì)胞凋亡功能的抑制將導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生及免疫功能的異常，而細(xì)胞凋亡功能亢進(jìn)與組織損傷和器官功能衰竭的發(fā)病密切相關(guān)。

4）TUNEL凋亡檢測(cè)

細(xì)胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的作用下，將脫氧尿苷三磷酸核苷酸(dUTP)和熒光素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)，稱為TUNEL法。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。由此，TUNEL是檢測(cè)DNA 片段化（細(xì)胞凋亡）的常用方法。

細(xì)胞凋亡是生命的基本現(xiàn)象，是維持體內(nèi)細(xì)胞數(shù)量動(dòng)態(tài)平衡的基本措施。在胚胎發(fā)育階段通過細(xì)胞凋亡清除多余的和已完成使命的細(xì)胞，保證了胚胎的正常發(fā)育；在成年階段通過細(xì)胞凋亡清除衰老和病變的細(xì)胞，保證了機(jī)體的健康。和細(xì)胞增殖一樣細(xì)胞凋亡也是受基因調(diào)控的精確過程。

細(xì)胞功能研究相關(guān)檢測(cè)：

2D細(xì)胞培養(yǎng)和觀察

3D細(xì)胞培養(yǎng)和觀察

原代細(xì)胞分離/培養(yǎng)/鑒定

細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)（MTT 法/CCK8 法）

細(xì)胞凋亡檢測(cè)（AnnexinV FITC/PI雙染流式法/Tunel法）

細(xì)胞周期檢測(cè)（PI染料標(biāo)記流式法）

細(xì)胞遷移/侵襲檢測(cè)（劃痕法/Transwell法）

流式細(xì)胞分選（流式細(xì)胞術(shù)）

細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)

小管形成實(shí)驗(yàn)（tube formation，體外血管生成實(shí)驗(yàn)）

細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞外泌體分離與鑒定

慢病毒包裝及穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選

電生理檢測(cè)

個(gè)性化細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（藥物篩選等）

細(xì)胞模型已經(jīng)于人類疾病研究和治療藥物的篩選領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。我司可根據(jù)客戶的具體方案提供多種細(xì)胞模型的構(gòu)建及相應(yīng)的細(xì)胞生物學(xué)功能檢測(cè)。

上海昆盟生物科技有限公司 (Coweldgen Scientific Co.,LTD) 是一家專注于生命科學(xué)領(lǐng)域提供相關(guān)試劑產(chǎn)品和服務(wù)的生物高科技企業(yè)，坐落于上海聚科生物產(chǎn)業(yè)園。公司提供種類齊全的細(xì)胞系和多種原代細(xì)胞、質(zhì)量穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)試劑產(chǎn)品、成熟高效的技術(shù)服務(wù)。本著“守正創(chuàng)新，科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)"的理念，我們以高標(biāo)準(zhǔn)塑造行業(yè)品牌，以全新視野構(gòu)建現(xiàn)代企業(yè)，勇于探索和創(chuàng)新。公司業(yè)務(wù)范圍涉及全國各省市自治區(qū)，與國內(nèi)多家醫(yī)院、高校、科研院所、生物科技公司建立了良好的合作關(guān)系，贏得了良好的市場(chǎng)聲譽(yù)和廣泛的認(rèn)可，我們保證將繼續(xù)為廣大科研用戶提供專業(yè)、高效、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)！

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